母种培养基的制备方法是：选用新鲜、未发芽、表皮未变绿 、无病虫的马铃薯，洗净、去皮、挖去牙眼，称取200克，切 成薄片，放入不锈钢锅或烧杯内，加水1 200毫升，在电炉或 酒精灯上煮沸30分钟，其间不断搅拌，并补水至1 000毫升。
用2~4层纱布过滤，取其汁液。在滤液中加入琼脂，继续加热 ，使其溶化，并用2~4层纱布过滤。然后加入葡萄糖及其他配 料，充分搅拌，补水至1 000毫升。
将培养基的pH值调至5.5～6。一般用柠檬酸或食醋调低pH值 ，用石灰、氢氧化钠或碳酸钠调高pH值。
将玻璃漏斗放在铁架台的铁环上，漏斗下口套接一段乳胶管 ，再接一个5～6厘米长的玻璃管，乳胶管中间夹一个弹簧夹 ，趁热把培养基溶液倒入漏斗。
左于持1个或4～5个试管，左右排齐，让中指和食指位于试管 底部1/4处。将玻璃管头插入试管底部，右手控制弹簧夹子， 让培养液流入试管底部1/4长度。注意不能让培养基溶液沾染 试管壁及试管口，否则必须在其凝固后，用接种钩取出，并 用清洁、潮湿的纱布将其擦去，以防沾染棉塞。
取适量棉花做成紧实、圆滑的棉塞，将小头塞入试管口内1／ 2，留在试管口外1／2，其松紧程度以手提棉塞不掉为宜。把 试管竖直放入铁丝筐内，或10支试管捆成一捆，上面用牛皮 纸或旧报纸包住棉塞，并用线绳绑捆住，以防脱落，然后准 备装锅灭菌。
母种培养基必须进行高压灭菌，下面会做详细介绍。
在工作台面上，放上数根薄木条，将热试管（50℃~60℃）从 灭菌锅内竖起取出，管口一端放在木条上，其倾斜度以管中 液体的斜面长达试管的3/4为度。
如在冬季生产，为了降低培养基与室内的温差，尽量减少试 管内冷凝水出现，应用纱布或干净报纸将全部试管盖好。清 除锅内余水和杂物。
将灭过菌的试管（培养基）随即取出数根，放入恒温培养箱 中，在23℃～27℃下培养5～7天，确认无杂菌生长后，再行 接种。否则，不能使用。
