栽培种培养基的灭菌通常采用常压灭菌。用常压灭菌锅灭菌时，若用袋料，袋距锅壁要在10厘米以上，以防粘连，当锅内温度上升至100℃时，维持14～18小时，停火再焖1夜，第二天出锅备用。
接种在接种室或接种箱内完成，程序与原种制作相同。用塑料袋作容器的，接种时需要两人配合，一人将袋口解开，一人将原种用长柄镊子镊入袋内，然后立即把袋口扎好。接好种的袋子送往培养室，在22℃～23℃下培养30~50天，菌丝发好，即成为培养种。
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